En mayo de 1520, los mexicas realizaron uno de sus principales festejos religiosos, lamado Tóxcatl. Otra vez, los espanoles temieron ser atacados al ver participar a jóvenes guerreros en esta fiesta y el capitán Pedro de Alvarado decidió atacarlos, pues Cortés se dirigia hacia Veracruz. El resultado fue otra masacre atroz.Los espanoles mataron a miles de jóvenes, ninas, ninos y ancianos desarmados en la plaza principal de México-Tenochtitlan, mientras danzaban en honora su dios;no existió amenaza alguna hacia los hispanos.
La matanza del Templo Mayor, como se conoce a la fecha, marcóel fin de la paz. En venganza por este ataque a traición, los mexicas hicieron la guerra a los expedicionarios. Los combates en México-Tenochtitlan duraron dos meses. Durante ese periodo, Cortés regresó de Veracruz con mil expedicionarios más que llegaron a la costa y entró a la ciudad, donde también fue atacado. Ante la posibilidad de morir sitiados en el palacio donde se alojaban, los expedicionarios decidieron escapar a escondidas de la ciudad, la noche del 30 de junio de 1520.
En su huida fueron descubiertos y los atacantes mexicas mataron a más de dos terceras partes de los espanoles y a la gran mayoria de sus aliados. Por eso, los espanoles la llamaron la"Noche Triste",aunque para los mexicas no lo fue, pues marcó la expulsión de sus enemigos de la ciudad.
Cuando se recuperaron de la derrota, tanto los expedicionarios como sus aliados comenzaron una nueva ofensiva contra los mexicas,a partir de octubre de 1520. Esta vez, los indigenas aliados convencieron a Hernán Cortés de no atacar directamente México-Tenochtitlan,sino primero a los pueblos sometidos a los mexicas y pasarlos a su bando para hacer crecer la coalición.

Matanza del Templo Mayor, en Fray Diego Durán, Historia de las Indias de la Nueva España e Islas de Tierra Firme. Folio 211f. Entre 1579 y 1581. Biblioteca Nacional de Espana.